Née à Rome, soeur de sainte Blésille et fille de sainte Paule et du sénateur romain Toxotius. À la mort de son père, en 380, Paule et Eustochium vécurent à Rome, menant une vie austère, à l’image de celle des Pères du Désert.
Quand saint Jérôme vint à Rome depuis la Palestine, toutes 2 en firent leur guide spirituel. Hymettius, un oncle d’Eustochium, ainsi que sa femme, Prætextata, essayèrent vainement de persuader Eustochium de quitter cette vie de pauvreté et de mortifications et de jouir des plaisirs du monde. Au contraire, aux environs de 384, la jeune fille fit vœu de virginité perpétuelle.
Saint Jérôme retourna en Palestine un an plus tard, et fut rapidement suivi par Paula et Eustochium.
En 386, Eustochium et sa mère accompagnèrent saint Jérôme en Égypte, où ils visitèrent les ermites de Nubie [1], pour étudier et ensuite imiter, leur mode de vie. Ils retournèrent ensuite en Palestine, et s’installèrent définitivement à Bethléem [2].
Paule et Eustochium érigèrent 4 monastères et un hôpital près du lieu de naissance du Christ.
Un des monastères fut occupé par des moines, sous la direction de saint Jérôme. Les 3 autres furent dirigés par Paule et Eustochium, et accueillirent de nombreuses vierges rassemblées autour d’elles.
Eustochium et sa mère étudiaient longuement les Saintes Écritures avec saint Jérôme. Eustochium parlait le latin et le grec couramment et lisait la Bible en hébreu. De nombreux commentaires de saint Jérôme furent écrits sous son influence, et il lui dédicaça ses commentaires des prophètes Isaïe et Ézéchiel , ainsi que de nombreuses lettres pour son édification spirituelle.
En 404, elle succéda à sa mère à la tête du monastère de Bethléem. En 417, les monastères de Bethléem furent attaqués par des bandits qui les pillèrent, et en incendièrent un, blessant ou tuant les moniales. On supposa qu’ils n’étaient que les sbires du patriarche de Jérusalem et des Pélagiens [3] contre lesquels saint Jérôme avait écrit quelques pamphlets virulents.
Ensemble, saint Jérôme et Eustochium envoyèrent une lettre au Pape Innocent 1er, qui réprimanda vertement le patriarche. Peu de temps après, Eustochium mourait, et fut remplacée dans sa tâche par sa nièce, Paula.