Fille de Manuel 1er du Portugal et de sa seconde épouse, Marie d’Aragon, elle épousa 10 mars 1526 à Séville Charles Quint. Celui-ci tomba immédiatement amoureux de cette femme en laquelle une très grande beauté physique s’alliait une aussi grande hauteur morale et lui fût constamment fidèle. Lors de son départ pour les Allemagnes, il n’hésita pas à lui confier la régence de l’Espagne et de ses dépendances.