Fille de Guillaume fitz Robert, comte de Gloucester, et de son épouse, Hawise de Beaumont. Son grand-père paternel Robert de Gloucester était le fils illégitime du roi Henri 1er d’Angleterre. Son père meurt en 1183 et, comme il n’a aucun héritier mâle, le titre de comte retourne à la Couronne. Une nouvelle création lui est accordée en 1186, et elle devient comtesse de Gloucester de jure.
Le 29 août 1189, elle se marie avec Jean, comte de Cornouailles, au château de Marlborough, dans le Wiltshire, et son époux assume alors le titre en son droit. Peu avant ou après son accession au trône en 1199, Jean obtient l’annulation de son mariage, infécond. Le divorce est accepté par le pape Innocent III pour cause de consanguinité. En effet, ils sont cousins, descendant l’un et l’autre du roi Henri 1er. Isabelle n’a jamais été reconnue comme reine, et son ancien titre retourne à la Couronne. Son neveu Amaury VI de Montfort Évreux reçoit le titre de comte de Gloucester en 1199. Après sa mort, elle retrouve son titre.
Plus tard, elle se remarie avec Geoffrey III de Mandeville, 2ème comte d’Essex, le 20 janvier 1214. Après la mort de son second époux en 1216, elle se marie avec Hubert de Burgh en septembre 1217. Isabelle meurt un mois après, et est enterrée dans la cathédrale de Cantorbéry.